Abstracto

Selección y prueba de genes de referencia superiores en todo el genoma para la normalización cuantitativa de la expresión génica en el tabaco (Nicotiana tabacum)

Yushuang Guo, Ruiyuan Li, Zeshan Asgher, Imran Haider Shamsi, Shizhou Yu, Jiehong Zhao y Xueliang Ren

La qRT-PCR es una herramienta muy precisa para la medición de la expresión génica en todos los organismos. La precisión y la reproducibilidad de los resultados de la qRT-PCR dependen de la normalización de los datos de expresión utilizando genes de referencia fiables. Para diversificar el conjunto de genes de referencia fiables en el tabaco, se midió la estabilidad de la expresión de 44.873 genes del tabaco (EST) utilizando una micromatriz diseñada a medida en un conjunto diverso de 21 muestras, que representan varios tipos de tejidos y etapas de desarrollo. Se seleccionaron un total de 14 genes como genes de referencia candidatos porque parecían ser los más estables. Estos genes se compararon con dos genes de mantenimiento ampliamente utilizados (L25 y EF-1a) para su posterior validación mediante qRT-PCR. Los resultados mostraron que el gen 3 (NADH deshidrogenasa) y el gen 4 (chaperonina CPN60-2) exhibieron la mayor estabilidad de expresión y que fueron incluso más estables que L25 y EF-1a. En conjunto, nuestros resultados proporcionan un conjunto más amplio de genes de referencia estables para el análisis de la expresión génica del tabaco.