Abstracto

Expresión de la proteína principal de la cápside del parvovirus cainina por levadura (Pichia pastoris) y purificación eficiente utilizando arginina en cromatografía de afinidad

Ying He, Qiumei Shi, Sumin Pan, Cairan Yang, Yanying Zhang y Xinhua Shao

Se desarrolló un ensayo inmunocromatográfico (IC) para la detección rápida del parvovirus canino utilizando anticuerpos monoclonales (McAbs) contra el parvovirus canino (CPV-2). Para preparar los McAbs, el gen que codifica la proteína VP2 de CPV-2a se expresó en un vector de expresión de Pichia pastoris pPICZ-A. La VP2 recombinante tenía una función antigénica similar a la proteína de la cápside nativa, como se demostró mediante inmunotransferencia utilizando antisuero policlonal CPV-2. Los McAbs contra CPV-2 se produjeron fusionando la línea celular de mieloma SP2/0 con células de bazo de ratones Balb/C inmunizados con proteína VP2 recombinante purificada. Mediante ELISA se demostró que los McAbs reconocían específicamente los epítopos VP2 de CPV-2 pero no los de otros virus caninos como el virus del moquillo canino (CDV) o el adenovirus canino (CAV). Un ensayo IC desarrollado con los McAbs fue adecuado para la detección rápida del parvovirus canino. Se analizaron muestras fecales (120) de perros sospechosos de infección por CPV-2 mediante el ensayo de hemaglutinación (HA) y el ensayo de IC, y 52 y 53 muestras dieron positivo para CPV-2, respectivamente. La comparación entre los dos ensayos diferentes reveló que el ensayo de IC es tan sensible como la HA; la sensibilidad y la especificidad del ensayo de IC son del 98,6% y del 98,1%, respectivamente.