Abstracto

Aislamiento eficiente y análisis funcional de mutantes espontáneos insensibles a bacteriófagos de Streptococcus thermophilus

Chengjie Ma, Jinzhong Lin, Guangyu Gong, Zhenmin Liu, Zhengjun Chen, Aimin Ma

El uso de cepas resistentes a bacteriófagos que tengan propiedades tecnológicas satisfactorias es esencial para prevenir infecciones por fagos en procesos de fermentación industrial . Aquí, describimos un método mejorado para el aislamiento de mutantes espontáneos insensibles a bacteriófagos (BIM) de Streptococcus thermophilus. La concentración de grandes volúmenes de cultivos secundarios de S. thermophilus, su subcultivo en leche desnatada con altos títulos de bacteriófagos y su inoculación con el fenotipo de acidificación rápida de la leche en múltiples pases fueron críticos para aumentar la probabilidad de obtener mutantes, mejorar la eficiencia del aislamiento y mantener el rendimiento tecnológico. Obtuvimos grandes cantidades de BIM después de cada ronda de selección, con una eficiencia de aislamiento superior al 85%. Analizamos nueve BIM, y todos ellos fueron similares a su cepa parental S. thermophilus St1 con respecto a la sinéresis, la capacidad de retención de agua y la viscosidad aparente. En comparación con la cepa parental, siete de las nueve variantes poseían actividades acidificantes equivalentes, y las dos variantes restantes exhibieron un excelente rendimiento de acidificación. Se encontraron uno o dos espaciadores nuevos de los fagos correspondientes en los nueve BIM, lo que demuestra que el sistema CRISPR/Cas era responsable de la resistencia a los fagos de S. thermophilus.