Abstracto

Análisis de clonación y expresión de Vv-lac3, un nuevo gen funcional de lacasa que participa en la elongación del estípite, basado en la secuencia genómica de Volvariella volvacea

Yuanping Lu, Guangmei Wu, Lingdan Lian, Lixian Guo, Zhiyun Yang, Wei Wang, Binzhi Chen, Baogui Xie

Las lacasas fúngicas siempre desempeñan papeles importantes en varios procesos fisiológicos y de desarrollo. Aquí, clonamos un gen de lacasa, y lo llamamos Vv-lac3, ADNc de Volvariella volvacea, y expresamos el ADNc en Pichia pastoris. El ADNc de Vv-lac3 consistía en 1599 pb que contenían un marco de lectura abierto (ORF) que codificaba 532 aminoácidos. El análisis de los aminoácidos deducidos reveló que Vv-lac3 poseía un péptido señal de 19 aminoácidos en el extremo N-terminal y una proteína madura de 513 aminoácidos. Vv-lac3 contenía cuatro sitios de unión de cobre conservados, que es la estructura típica de las lacasas fúngicas. El análisis filogenético mostró que Vv-lac3 tenía un alto grado de identidad con otras lacasas de basidiomicetos. Los análisis de PAGE nativo y SDS-PAGE demostraron que el producto del ADNc de Vvlac3 de P. pastoris era una lacasa funcional con una masa molecular de 65 kDa. La expresión del gen Vv-lac3 en V. volvacea aumentó durante la etapa de botón hasta la etapa de elongación; alcanzó un pico en la etapa de elongación y luego disminuyó en la etapa de maduración, lo que sugiere que este gen desempeña un papel regulador en la elongación del estípite en V. volvacea.