Abstracto

Un nuevo método de PCR en tiempo real con transcriptasa inversa para la cuantificación de Vibrio parahemolyticus viable en camarones crudos basado en un método de construcción rápida de curva estándar

Mengtong Jin, Haiquan Liu, Wenshuo Sun, Qin Li, Zhaohuan Zhang, Jibing Li, Yingjie Pan, Yong Zhao

Vibrio parahemolyticus es un patógeno importante que provoca enfermedades alimentarias asociadas a los mariscos. Por lo tanto, se necesitan métodos rápidos y confiables para detectar y cuantificar la cantidad total de V. parahaemolyticus viable en los mariscos. En este ensayo, se ha desarrollado una PCR con transcriptasa inversa en tiempo real (RT-qPCR) basada en ARN sin un paso de enriquecimiento para la detección y cuantificación de la cantidad total de V. parahaemolyticus viable en camarones. Los estándares de ARN con los segmentos objetivo se sintetizaron in vitro con la ARN polimerasa T7 y posteriormente se convirtieron en ADNc para establecer la curva estándar para cuantificar V. parahaemolyticus. La eficiencia de la reacción fue del 94,56% y estuvo dentro del rango aceptable. Sin enriquecimiento previo, la sensibilidad de la RT-qPCR para cuantificar V. parahaemolyticus en camarones fue de 58 ufc/g, aproximadamente. Además, la supervivencia de V. parahaemolyticus en muestras de camarones enriquecidas se cuantificó mediante RT-qPCR, qPCR basada en ADN y el método de recuento en placa estándar. Los resultados de cuantificación de RT-qPCR han mostrado una buena correlación estadística (R2=0,96) en comparación con el método de recuento en placa estándar. Sin embargo, el coeficiente de correlación entre el método de recuento en placa y el qPCR basado en ADN fue solo de 0,85 para cuantificar V. parahaemolyticus. Con base en los resultados, este nuevo método podría ser una forma eficaz de proporcionar datos cuantitativos confiables sobre V. parahaemolyticus viable en camarones.