Abstracto

Rizosecreción del péptido antimicrobiano recombinante Ranalexin de raíces peludas de tabaco transgénico

Rasha Abou Aleinein, Holger Schäfer, Michael Wink

La rizosecreción de proteínas recombinantes funcionales de raíces cultivadas in vitro en el medio hidropónico ofrece una tecnología atractiva para simplificar los procedimientos de purificación posteriores. El objetivo del presente estudio fue la producción y secreción del péptido antimicrobiano (AMP) ranalexina de las raíces pilosas de Nicotiana tabacum que se transformaron mediante agroinfección. Se expresó una ranalexina marcada con His bajo el control del promotor CaMV 35S y se dirigió a la vía de secreción de la planta fusionando su extremo N al péptido señal del ER de la calreticulina. La acumulación máxima de ranalexina en el tejido de la raíz pilosa después de 20-25 días de cultivo representó aproximadamente el 3,36% de la proteína soluble total. La ranalexina secretada alcanzó una concentración de 0,28 mg/L en el medio el día 25. El nivel extracelular de ranalexina se pudo aumentar a 1,64 mg/L mediante la adición de polivinilpirrolidona al medio de cultivo. La ranalexina secretada es activa contra bacterias Gram positivas y Gram negativas, incluidas cepas que son multirresistentes a los antibióticos, como Staphylococcus aureus MRSA resistente a la meticilina, Enterococcus VRE resistente a la vancomicina, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Acinetobacter baumanii, así como aislados clínicos de MRSA. Nuestros resultados demuestran la utilidad de los cultivos de tejidos vegetales, especialmente las raíces pilosas del tabaco, como un sistema alternativo de producción de ranalexina y otros péptidos antimicrobianos.