Abstracto

Purificación y caracterización de β-1,3-glucanasa de Candida oleophila para el biocontrol de Penicillium expansum

Carlos Tamayo-Urbina, Víctor Guerrero-Prieto, César Guigón-López, Francisco Vargas-Albores, David Berlanga-Reyes, Carlos Acosta-Muniz5 y Damaris Ojeda-Barrios

Candida oleophila fue aislada originalmente de la cáscara de la manzana en la región de Cuauhtémoc, Chihuahua, México, y utiliza la producción de exo-β-1,3-glucanasa como un modo de acción contra Penicillium expansum en manzanas poscosecha. Se determinó la actividad de β-1,3-glucanasa generada por C. oleophila en un medio con sal mínima utilizando glucosa, laminarina o fragmentos de pared celular de P. expansum como única fuente de carbono. La actividad más alta de β-1,3-glucanasa (249 U/L) se obtuvo después de 48 horas de incubación utilizando solo glucosa. La β-1,3-glucanasa se purificó a partir de un medio de crecimiento utilizando cromatografía de intercambio aniónico en DEAE Sepharose, que aumentó la actividad específica de β-1,3-glucanasa 74 veces, en comparación con el extracto crudo después de la ultrafiltración. La electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS demostró una β-1,3-glucanasa purificada con un peso molecular estimado de 48,3 kDa. La enzima purificada hidrolizó la laminarina a glucosa como producto final y se identificó en geles de poliacrilamida nativos como una proteína monomérica. La actividad óptima se produjo a pH 5 y a 40 °C, y la enzima fue estable a 30 °C durante 1 hora. La exo-β-1,3-glucanasa purificada, cuando se enfrentó a conidios de P. expansum, redujo la germinación de los conidios al 51,8 % y el crecimiento micelial al 31 %. Los resultados indican que un modo de acción de C. oleophila para controlar P. expansum es mediante la producción de β-1,3-glucanasa y que la enzima purificada