Abstracto

Un método mejorado de preparación de muestras para la detección de Plasmodium falciparum en muestras de sangre

Thavamani Rajapandi

La microscopía sigue siendo el estándar de oro para la detección de parásitos de la malaria en muestras de sangre, mientras que las pruebas de diagnóstico rápido (RDT) y los métodos basados ??en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se emplean cada vez más para aplicaciones de campo, cada uno con limitaciones. Utilizando aislamientos de parásitos de Plasmodium falciparum cultivados in vitro, analizamos varios métodos de preparación de muestras para la detección basada en PCR. Las muestras de prueba sometidas a lisis hipotónica, seguida de una depleción casi completa de hemozoína (Hz) y hemoglobina (Hb) y la posterior amplificación por PCR del gen msp2 dieron como resultado un límite de detección que fue mejor que las muestras preparadas en condiciones de tampón isotónico. Además, amplificamos secuencias de varios genes diana, incluidos msp2, msp1, 18S rRNA y eba175 a partir de extractos de parásitos preparados por lisis hipotónica. Identificamos un conjunto de cebadores que amplificaba una región dentro de eba175 que daba un límite de detección mayor de 1 parásito por 5 × 107 glóbulos rojos (RBC), así como un conjunto de cebadores para msp2 que daba un límite de detección de 1 a 5 parásitos por 5 × 107 RBC mediante análisis de PCR estándar. Los objetivos restantes exhibieron límites de detección máximos de 20 a 30 parásitos por 5 × 107 RBC. Este método recientemente desarrollado es de 100 a 500 veces más sensible que los métodos basados ??en PCR disponibles actualmente que detectan de 30 a 100 parásitos por 5 × 106 RBC en 1 μl de sangre). Además, este método podría usarse en diagnósticos basados ??en PCR implementables en el campo, así como para la genotipificación de parásitos y el control de calidad de RDT fallidos.