Abstracto

Espectrometría de masas 2017: eficacia y estabilidad del antiveneno de escorpión en diferentes condiciones de almacenamiento - Elhag DE - Universidad UMST

 Elhag DE 

 Introducción En muchas partes del mundo las picaduras de escorpión son un problema de salud pública debido a la alta incidencia o gravedad de los envenenamientos o por estas dos razones al mismo tiempo. Muchos escorpiones potencialmente peligrosos habitan en países subdesarrollados o en desarrollo y numerosos envenenamientos no se denuncian. Oficialmente, se ha estimado que hay 1,2 millones de picaduras de escorpión por año en todo el mundo que provocan 3250 muertes (0,27%). El Informe Anual de 2014 del Sistema Nacional de Datos de Envenenamiento (NPDS) de la Asociación Estadounidense de Centros de Control de Envenenamiento informó 16.440 menciones de casos de envenenamiento por escorpión. Sin embargo, debido a la falta de denuncia, es probable que se trate de una subestimación del número real de picaduras. Los venenos de escorpión contienen muchos componentes bioactivos. Se ha demostrado que varios de los péptidos de cadena larga son responsables de efectos neurotóxicos. Estas toxinas son polipéptidos básicos con pesos moleculares de alrededor de 7000 kD, sin acción enzimática y se ha demostrado que afectan la permeabilidad iónica de las células excitables. Estas preparaciones están incluidas en la Lista de Medicamentos Esenciales de la OMS y deben formar parte de cualquier paquete de atención primaria de salud donde se produzcan picaduras de escorpión. El antiveneno se produce ordeñando el veneno del escorpión deseado, inyectándolo en un caballo, oveja, conejo o cabra para estimular el sistema inmunológico del animal. Existe una necesidad urgente hoy en día de garantizar la disponibilidad de antivenenos seguros, efectivos y asequibles, en particular para aquellos en los países en desarrollo, y de mejorar el control regulatorio sobre la fabricación, importación y venta de antivenenos. El veneno de escorpión contiene péptidos neurotóxicos que interactúan con los canales iónicos, causando daños masivos al sistema nervioso. Gracias a esta interacción, el veneno de escorpión puede provocar excitación en los nervios y músculos, secreción hormonal y alteraciones en el control del equilibrio de sal y agua y la regulación de la presión arterial. Los síntomas clínicos durante el envenenamiento indican una estimulación general de los sistemas nerviosos autónomo, somático y periférico. La gravedad del envenenamiento del escorpión y el aumento del riesgo de mortalidad, especialmente en niños, se atribuyen principalmente a la patología cardiorrespiratoria. Materiales y reactivos Pruebas químicas Determinación del pH: El pH de las muestras seleccionadas se midió utilizando un medidor de pH apropiado calibrado justo antes de su uso en comparación con soluciones tampón estándar (pH 4 y pH 7). La obligación de la OMS de producir antiveneno indica que el pH del antiveneno debe estar entre 6 y 7. Determinación de m-cresol: Preparación de la solución tampón pH 9 Solución A: 6,18 g de ácido bórico y 7,45 g de cloruro de potasio (0,1 M) para disolver en 1000 ml de agua. Solución B: hidróxido de sodio 0,1 N R. A 1000 ml de solución A, se añadieron 400 ml de solución B, se añadió gradualmente hidróxido de sodio a la mezcla hasta alcanzar un pH 9.Solución de ferricianuro de potasio Exactamente 5 g de ferricianuro de potasio se lavaron con 3 ml de agua y luego se disolvieron y diluyeron con agua a 100 ml (esta preparación se preparó inmediatamente antes de su uso). Solución de aminoantipirina R: 100 mg de aminoantipirina se disolvieron en 100 ml de solución tampón de pH 9. Preparación de la muestra Se prepararon dos grupos de prueba. El primer grupo consta de seis bulbos antiveneno que se seleccionaron aleatoriamente del lote de antiveneno de escorpión almacenado en condiciones reales (3 ± 2 ° C). El segundo grupo, compuesto por seis ampollas de antisuero, se sometió a condiciones aceleradas (25 ± 3 ° C, HR75%). 0,2 ml de cada muestra (contiene hasta 0,35% de m-cresol) se diluyeron en 3,5 ml de agua para dar una concentración final de (200 µg / ml). Procedimiento Se etiquetaron para su uso un total de siete vasos de precipitados, el primero se definió como blanco. Se añadieron a cada vaso de precipitados seis vasos de precipitados más de 0,5 ml de las muestras preparadas. A continuación, se añadieron sucesivamente a cada vaso de precipitados 5 ml de aminoantipirina y 5 ml de ferricianuro de potasio. Las muestras de prueba preparadas se dejaron durante 10 minutos a temperatura ambiente, después se midió la absorbancia de cada muestra a 540 nm utilizando un espectrofotómetro UV/vis. Preparación estándar de m-cresol La solución madre de solución de m-cresol (250 µg/ml) se preparó pesando exactamente 1 g de m-cresol y transfiriéndolo a un matraz volumétrico de 1 litro y el volumen se ajustó a la marca utilizando agua destilada. Se tomaron exactamente 2,5 ml y se completaron hasta 10 ml. Se realizó una serie de diluciones apropiadas para construir la curva estándar y las concentraciones de las muestras se determinaron a partir de la curva estándar. Determinación del contenido total de proteínas/determinación del contenido de albúmina: La solución antiveneno se diluyó con una solución de sacarosa al 25% en tampón de fosfato 0,01 M, pH 7, hasta un contenido de proteína de 10 mg/ml. Se aplicaron muestras de 10 µl del antiveneno a las membranas de gel de poliacrilamida en la cámara de separación y se sometieron a electroforesis. Una muestra de albúmina estándar de 1 mg/ml se analizó simultáneamente con muestras de suero antiveneno. Luego, el gel se retiró de la cámara de separación y se colocó en la cámara de revelado y el revelado se llevó a cabo utilizando la misma máquina de acuerdo con el siguiente método programado. Las movilidades electroforéticas del antiveneno y la albúmina se compararon después de la tinción con azul de Coomassie. Resultados Prueba de pH: Las mediciones de pH de ampollas seleccionadas aleatoriamente después de ser sometidas a dos condiciones de almacenamiento diferentes (real y acelerada) mostraron que los valores eran comparables y estaban dentro del rango aceptable indicado para el antiveneno producido. La obligación de la OMS de producir antivenenos, decía que el PH del antiveneno debía estar entre 6 y 7. Las mediciones del contenido de m-cresol de las ampollas se almacenaron previamente en condiciones de almacenamiento adecuadas (reales, 3 ± 2ºC) y en condiciones aceleradas (25 ± 3ºC, HR75%).mostró que hubo un cambio menor en la concentración de m-cresol, pero este cambio no fue significativo ni estuvo fuera del rango de límites aceptables indicados en el folleto de la ampolla. La medición del contenido de proteína del antiveneno de escorpión polivalente obtenido aleatoriamente del lote y mantenido bajo las dos condiciones de almacenamiento seleccionadas, condición de almacenamiento en tiempo real (3 ± 2ºC) y condición de almacenamiento acelerado (25 ± 3ºC, RH75%). mostró que el contenido de proteína en las dos clases de muestras era comparable. Las directrices de la OMS establecen que la concentración total de proteína en antivenenos preferiblemente no debe exceder los 10 g/dl, a menos que la autoridad competente justifique y autorice un contenido de proteína más alto. Conclusión El presente trabajo ha sugerido que mantener el antiveneno a la temperatura y humedad especificadas y cuando se expone a la luz durante un período de tiempo más largo no afecta al antiveneno en términos de esterilidad o eficacia.

Descargo de responsabilidad: este resumen se tradujo utilizando herramientas de inteligencia artificial y aún no ha sido revisado ni verificado.

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