Abstracto

Congreso de Biotecnología 2015: sFRP1 recombinante en el tratamiento del cáncer - Archita Ghoshal - Instituto Indio de Tecnología de Guwahati

Archita Ghoshal y Siddhartha Sankar Ghosh

La vía Wnt es un aspecto crítico en la compleja red de moléculas de señalización implicadas en el cáncer. En células no malignas, la cascada de señales Wnt está bloqueada por las proteínas relacionadas con Frizzled secretadas (sFRP), una familia de glicoproteínas. Sin embargo, están silenciadas epigenéticamente en las células cancerosas. En este estudio, intentamos administrar sFRP1 humana recombinante purificada a partir de un cultivo bacteriano en células de cáncer cervical (HeLa) para determinar su actividad anticancerígena. El gen sFRP1 humano se clonó en el vector de expresión bacteriano pGEX-4T2. La proteína recombinante se sobreexpresó como cuerpos de inclusión en E. coli BL21 (DE3). Después de la optimización del proceso de solubilización de la proteína utilizando detergentes, GST-sFRP1 se purificó hasta homogeneidad mediante cromatografía de afinidad con glutatión agarosa. El análisis MALDI verificó la firma peptídica particular de GST-sFRP1 y la integridad estructural se caracterizó mediante espectros de dicroísmo circular. Se descubrió que la proteína recombinante purificada ejercía un efecto antiproliferativo significativo sobre las células HeLa en concentraciones nanomolares. El Western blot con anticuerpos contra beta-catenina y beta-catenina fosforilada confirmó la implicación de la vía Wnt canónica. La terapia de combinación mostró que la sFRP1 recombinante quimiosensibilizó sustancialmente las células HeLa hacia el fármaco quimioterapéutico convencional cisplatino. El recubrimiento de la proteína terapéutica sobre nanopartículas compuestas novedosas incrustadas en nanogrupos de oro facilitó la liberación sostenida de la proteína y mejoró su actividad funcional. La notable propiedad de fluorescencia de los nanogrupos de oro se aprovechó para fines de seguimiento y obtención de imágenes. En general, el nanosistema terapéutico basado en sFRP1 puede resultar revolucionario en el campo de la teranóstica del cáncer. La proteína 1 relacionada con Frizzled emitida (SFRP1) es un bloqueador característico de la vía de señalización de Wnt en células adultas ordinarias, pero está silenciada epigenéticamente en células de crecimiento maligno, lo que provoca un crecimiento desviado. En este estudio, hemos detallado nuevas nanopartículas compuestas fabricadas con quitosano y alginato insertados en nanoagrupaciones de oro, unidos a sFRP1 recombinante humano transmitido por bacterias. La vía Wnt, que se regula positivamente en la enfermedad, se ha enfocado explícitamente con las nanopartículas para lograr un efecto antiproliferativo en las células de crecimiento maligno, como se desprende de los niveles reducidos de partículas posteriores, en concreto, β-catenina, ciclina D1 y survivina. Las nanopartículas permitieron la llegada asistida de sFRP1 fuera de las células, donde es funcional. Además, las sorprendentes propiedades de iridiscencia de las nanoagrupaciones de oro se utilizaron para estudios de autorización, obtención de imágenes y seguimiento. El co-tratamiento de nanopartículas apiladas con sFRP1 con el fármaco cisplatino se centró en dos vías libres para inducir la apoptosis, como se registró mediante estudios basados ??en citometría de flujo. En términos generales, este nanosistema es prometedor para el seguimiento, la obtención de imágenes y el seguimiento del movimiento del crecimiento maligno con proteína curativa.La proteína 1 secretada relacionada con el frizzled (SFRP1) es un bloqueador natural de la vía de señalización de Wnt en células adultas normales, pero está silenciada epigenéticamente en células enfermas, lo que provoca una multiplicación anormal. En este estudio, hemos anunciado nuevas nanopartículas compuestas creadas con nanoagrupaciones de oro instaladas con quitosano y alginato, unidas a sFRP1 recombinante humano transmitido por bacterias. La vía Wnt, que se regula positivamente en el cáncer, se ha enfocado explícitamente con las nanopartículas para lograr un efecto antiproliferativo en las células enfermas, como se evidencia a partir de niveles reducidos de partículas posteriores, en particular, β-catenina, ciclina D1 y survivina. Las nanopartículas permitieron la llegada continua de sFRP1 fuera de las células, donde es funcional. Además, se abusó de las sorprendentes propiedades de brillo de las nanoagrupaciones de oro para investigaciones de control, imagen y seguimiento. El tratamiento conjunto de nanopartículas apiladas con sFRP1 con el fármaco cisplatino se centró en dos vías libres para activar la apoptosis, según se informó mediante estudios basados ??en citometría de flujo. En términos generales, este nanosistema es prometedor para el seguimiento, la obtención de imágenes y la focalización de la actividad de crecimiento maligno con proteínas útiles. La vía de señalización de Wnt desempeña un papel dominante en la multiplicación desviada en una serie de enfermedades. En células no cancerosas, los Wnt son bloqueados por las proteínas relacionadas con el frizzled (sFRP) emitidas que, en general, están reguladas a la baja en las células enfermas. Hemos refinado y descrito SFRP4 marcado con glutatión S-transferasa transmitido por bacterias a partir de un nuevo clon producido a partir de la raíz de células humanas. Las células de cáncer cervical (HeLa) y de enfermedad pulmonar (A549), en las que se observó que Wnt y las características relacionadas estaban transmitidas, se trataron con el sFRP4 recombinante purificado, que reveló una importante inhibición del crecimiento de células madre de hasta un 40 %. El presente estudio sobre la utilidad de este sFRP4 recombinante creado en bacterias para capturar la multiplicación de células cancerosas es el primero de su tipo, donde la captura de la etapa G2/M y la apoptosis temprana fueron evidentes. El aumento de la β-catenina fosforilada en el tratamiento con sFRP4 mostró una inhibición de la vía Wnt, que también se confirmó mediante la regulación negativa de las principales propiedades proliferativas, a saber, ciclina D1, c-myc y survivina. La acción funcional del sFRP4 recombinante también se abusó en el módulo de co-tratamiento con medicamentos quimioterapéuticos para desenredar eventos atómicos. En general, nuestra investigación sobre el sFRP4 recombinante purificado del huésped bacteriano es una gran promesa para enfocar la acción de Wnt para investigar nuevos métodos para combatir el cáncer. Recientemente, desglosamos el área genómica 8p11-12 para cambios de expresión de número y calidad duplicados en una tabla de líneas celulares de cáncer de mama humano y muestras esenciales. Descubrimos que SFRP1 (proteína secretada relacionada con el frizzled 1) a veces está subtransmitida incluso en tumores de mama con incrementos de números duplicados en esta región genómica.SFRP1 codifica un antagonista de señalización de WNT y desempeña un papel en el desarrollo de varios tipos de tumores sólidos. En este estudio, descompusimos la inhibición asociada a la metilación de la expresión de SFRP1 en células de cáncer de mama con el amplicón 8p11-12 y exploramos las propiedades inhibidoras de tumores de SFRP1 en células de cáncer de mama. La expresión de SFRP1 se redujo significativamente tanto en las líneas de células de cáncer de mama como en los ejemplos de tumores primarios en comparación con las células epiteliales mamarias humanas primarias típicas, incluso cuando se aumenta SFRP1. La inhibición de la expresión de SFRP1 en células de cáncer de mama con una mejora de la expresión de SFRP1 está relacionada con la metilación del promotor SFRP1. Además, la reconstrucción de la expresión de SFRP1 inhibió el crecimiento de células de cáncer de mama en monocapa y obstaculizó el crecimiento autónomo de anclaje. También examinamos la relación entre el silenciamiento de la función SFRP1 y la actividad de WNT en el cáncer de mama. La expresión ectópica de SFRP1 en las células de cáncer de mama inhibió tanto las vías de señalización de WNT autorizadas como las no autorizadas, y la expresión de SFRP1 se relacionó negativamente con la salida de un subconjunto de funciones de respuesta a WNT, incluyendo RET y MSX2. De esta manera, la regulación negativa de SFRP1 puede ser activada por eventos epigenéticos o potencialmente hereditarios y puede contribuir a la tumorigénesis del cáncer de mama humano a través de las vías de señalización de WNT tanto autorizadas como no autorizadas. © 2009 UICCLa regulación negativa de SFRP1 puede ser activada por eventos epigenéticos o potencialmente hereditarios y puede contribuir a la tumorigénesis del cáncer de mama humano a través de vías de señalización WNT tanto estándar como no canónicas. © 2009 UICCLa regulación negativa de SFRP1 puede ser activada por eventos epigenéticos o potencialmente hereditarios y puede contribuir a la tumorigénesis del cáncer de mama humano a través de vías de señalización WNT tanto estándar como no canónicas. © 2009 UICC