Abstracto

Autoinmunidad 2017: evaluación de un inmunoensayo enzimático menos sensible y rentable para estimar la seroincidencia temprana del VIH - Vinay Khanna - Universidad de Manipal

 Vinay Khanna e Indira Bairy 

Antecedentes y objetivo: Por lo general, los métodos moleculares, como la detección del ARN viral o el ADN proviral, son los métodos más sensibles para el diagnóstico temprano del VIH tipo 1; estos métodos implican tecnologías complejas y costosas y, por lo tanto, han permanecido en gran medida no disponibles en entornos con pocos recursos en el mundo en desarrollo. En este estudio, intentamos emplear un nuevo inmunoensayo del VIH1 menos sensible utilizando el método de avidez junto con el inmunoensayo enzimático sensible para diferenciar a las personas con infecciones recientes y de larga data por VIH-1. Métodos: Este estudio se realizó en un centro de atención terciaria en el sur de la India. Muestras de suero consecutivas (n = 261) obtenidas de pacientes seropositivos al VIH de más de 15 años de edad. Se obtuvo el consentimiento informado por escrito y los detalles epidemiológicos, clínicos y de laboratorio de todos los participantes. Todos los casos de infección por VIH-1 se analizaron con ELISA estándar y se confirmaron mediante la prueba Western blot. Estas muestras se analizaron además mediante el método del índice de avidez y estudios de afinidad para distinguir a los pacientes con VIH-1 reciente del establecido. El índice de avidez ≤0,9 se tomó como valor de corte para la infección reciente por VIH con una duración del VIH de menos de 6 meses. Resultados: De 261 pacientes, se encontraron 26 pacientes con un valor de prueba de avidez menor o igual a 0,9 y fueron clasificados como seroconvertidores recientes con anticuerpos aparecidos en suero durante ≤6 meses y 235 pacientes con un valor de avidez de >0,9 fueron clasificados como casos de largo plazo con anticuerpos circulantes durante >6 meses de duración. De 26 casos de infección reciente, un caso fue clasificado erróneamente como infectado recientemente utilizando el método de inmunoensayo de avidez mientras que la historia clínica era sugestiva de infección de largo plazo. Conclusiones: El inmunoensayo del índice de avidez fue desarrollado para características de fácil desempeño, económico, ahorrador de tiempo y no necesita requisitos de laboratorio sofisticados. Esta técnica también se puede realizar en el campo para identificar infecciones recientes, aunque existen posibilidades de clasificación errónea en individuos que tuvieron una infección de larga duración. La identificación de infecciones recientes basada en la combinación de otros métodos necesita más investigación para reducir la clasificación errónea y descubrir la verdadera incidencia del VIH lo antes posible. Un inmunoensayo es una prueba bioquímica que cuantifica la proximidad o agrupación de una macromolécula o una partícula pequeña en una solución utilizando un agente antagonista (en la mayoría de los casos) o un antígeno (en algunas ocasiones). El átomo identificado por el inmunoensayo se denomina con frecuencia "analito" y la mayoría de las veces es una proteína, aunque puede ser de diferentes tipos de partículas, de diferentes tamaños y tipos, siempre que se creen los anticuerpos correctos que tengan las propiedades satisfactorias para la medida. Los analitos en líquidos orgánicos, por ejemplo, suero u orina, se evalúan con frecuencia utilizando inmunoensayos con fines clínicos y de investigación. Los inmunoensayos vienen en diferentes organizaciones y variedades.Los inmunoensayos se pueden realizar de muchas maneras, con reactivos que se incluyen y se eliminan o se aíslan en varios puntos de la prueba. Las pruebas de varios pasos se denominan habitualmente inmunoensayos de partición o inmunoensayos heterogéneos. Algunos inmunoensayos se pueden realizar simplemente mezclando los reactivos y la prueba y realizando una medición física. Estas medidas se denominan inmunoensayos homogéneos o, con menos frecuencia, inmunoensayos de no separación. El uso de un calibrador se utiliza habitualmente en los inmunoensayos. Los calibradores son soluciones que se sabe que contienen el analito al que se hace referencia, y la convergencia de ese analito se conoce comúnmente. La comparación de la reacción de una solución a una muestra real frente a la reacción de la prueba creada por los calibradores permite descifrar la calidad de la señal en cuanto a la presencia o agrupación del analito en la muestra. Los inmunoensayos dependen de la capacidad de un agente antagonista para detectar y unir una macromolécula específica en lo que puede ser una mezcla compleja de macromoléculas. En inmunología, la macromolécula específica limitada por un neutralizador se denomina antígeno y la región de un antígeno a la que se une el agente contrarrestado se denomina epítopo. A veces, un inmunoensayo puede utilizar un antígeno para identificar la presencia de anticuerpos, que detectan ese antígeno, en una solución. Al final, en ciertos inmunoensayos, el analito puede ser un neutralizador en lugar de un antígeno. Además de la función de un agente contrarrestado con su antígeno, el otro componente clave de todos los inmunoensayos es una forma de proporcionar una señal cuantificable a partir de la sustancia autorizada. La mayoría de los inmunoensayos, aunque no todos, implican la unión sintética de anticuerpos o antígenos con un nombre perceptible. Existe una gran cantidad de marcadores en los inmunoensayos actuales, y permiten la identificación a través de varios métodos. Muchos marcadores son perceptibles porque emiten radiación, producen un cambio de color en una solución, fluorescen bajo la luz o pueden ser inducidos a emitir luz. Los inmunoensayos se pueden realizar en varias configuraciones. En general, un inmunoensayo se puede clasificar en una de las siguientes categorías según cómo se realice. Inmunoensayos homogéneos serios: en un inmunoensayo homogéneo serio, el analito no marcado en una muestra compite con el analito nombrado para unirse a un inmunizador. Luego se estima la cantidad de analito nombrado no unido. En principio, cuanto más analito haya en la muestra, más analito nombrado se extrae y luego se estima; por lo tanto, la cantidad de analito marcado no unido es relativa a la cantidad de analito en la muestra. Los inmunoensayos no competitivos de dos sitios generalmente comprenden un analito "intercalado" entre dos anticuerpos. Los ELISA se realizan con frecuencia en esta configuración. Inmunoensayos heterogéneos serios: como en un inmunoensayo homogéneo serio,El analito no marcado de un ejemplo compite con el analito marcado para unirse a un agente que actúa en contra. En las pruebas heterogéneas, el analito marcado no marcado se aísla o se elimina por lavado y se evalúa el analito marcado restante. Inmunoensayos no competitivos de un solo sitio: el analito marcado no marcado del ejemplo se une a los anticuerpos marcados. Los anticuerpos marcados no marcados se eliminan por lavado y se evalúan los anticuerpos marcados no marcados unidos. La potencia de la señal es directamente relativa a la medida del analito marcado no marcado.